Procédé de nettoyage d'acide nucléique

Nukleinsäureaufreinigungsverfahren

Nucleic acid purification method

Abstract

Isolation and/or purification of definite amount of nucleic acid from a nucleic acid containing sample, comprises: (a) contacting the nucleic acid containing sample with a defined amount of a nucleic acid binding phase, where the amount of nucleic acids in the sample exceeds the binding capacity of the amount of used nucleic acid binding phase; (b) binding the nucleic acids to the nucleic acid binding phase at a pH value, which is below the pKa value of at least one of the protonizable groups; and (c) eluting the nucleic acids at a pH value above the binding pH value. Isolation and/or purification of definite amount of nucleic acid from a nucleic acid containing sample, comprises: (a) contacting the nucleic acid containing sample with a defined amount of a nucleic acid binding phase with following properties in which (i) the nucleic acid binding phase comprises nucleic acid binding ligand that comprises at least one protonizable group, (ii) the nucleic acid binding ligands are present bonded to a carrier, and (iii) the nucleic acid binding phase comprises a surface having a low charge density, where the amount of nucleic acids in the sample exceeds the binding capacity of the amount of used nucleic acid binding phase; (b) binding the nucleic acids to the nucleic acid binding phase at a pH value (binding pH value), which is below the pKa value of at least one of the protonizable groups; and (c) eluting the nucleic acids at a pH value above the binding pH value, where a defined amount of nucleic acid is obtained. An independent claim is included for a kit, for isolation and/or purification of definite amount of nucleic acid from a nucleic acid containing sample, comprising the nucleic acid binding phase.
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Aufreinigung einer definierten Menge von Nukleinsäuren aus einer nukleinsäurehaltigen Probe, das wenigstens die nachfolgenden Schritte aufweist: a. Inkontaktbringen der nukleinsäurehaltigen Probe mit einer definierten Menge einer nukleinsäurebindenden Phase mit folgenden Merkmalen: (i) die nukleinsäurebindende Phase weist nukleinsäurebindende Liganden auf, die wenigstens eine protonierbare Gruppe aufweisen; (ii) die nukleinsäurebindenden Liganden liegen an einen Träger gebunden vor; (iii) die nukleinsäurebindende Phase weist eine Oberfläche mit einer niedrigen Ladungsdichte auf, wobei die Menge an Nukleinsäuren in der Probe die Bindungskapazität der eingesetzten Menge an nukleinsäurebindender Phase übersteigt; b. Bindung der Nukleinsäuren an die nukleinsäurebindende Phase bei einem pH-Wert (Bindungs pH-Wert), der unterhalb des pKs-Wertes wenigstens einer der protonierbaren Gruppen liegt; c. Elution der Nukleinsäuren bei einem pH-Wert, der oberhalb des Bindungs pH-Wertes liegt, wobei eine definierte Menge an Nukleinsäuren erhalten wird. Darüber hinaus werden entsprechende Kits sowie nukleinsäurebindende Phasen, die zur Aufreinigung von Nukleinsäuren eingesetzt werden können, offenbart.

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Patent Citations (5)

    Publication numberPublication dateAssigneeTitle
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NO-Patent Citations (1)

    Title
    Johnson et al.: "'Factory-Proof' long PCR enrichment and amplicon equalization for next generation resequencing applications" 2008, XP002570305 Gefunden im Internet: URL:https://www.invitrogen.com/etc/mediali b/en/filelibrary/Nucleic-Acid-Amplificatio n-Expression-Profiling/PDFs.Par.12017.File .dat/O-076831_SequalPrep%20Application%20N ote%201_0508.pdf> [gefunden am 2010-02-24]

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